板栗腐烂机理及防腐保鲜技术的研究一机柜箱轴套电缆沟隔膜泵面板壳体Rra

(1) 温度 将制成的PDA培养基装入三角瓶，每瓶50 mL，121℃灭菌30 min，冷却后倒平板培养基，用接种铲将用打孔器打好的圆形菌落块接种于平板上，每皿一块，分别放入5，10，15，体温监测装备的性能稳定20，25，30，35℃的恒温箱中培养，每个温度设3个重复，每天定时测量菌落生长直径大小.

(2) 碳源 培养基的配方：琼脂20 g，不同碳源20 g，H2O 1 000 mL，pH值为自然.其中纤维素用量为2 g，对照则不加碳源.灭菌，接种，测量方法同1.2.1.1.接种后将培养皿倒减振器置于25℃恒温箱中培养.

(3) 光照 培养基采用PDA培养基.光照处理采用光暗交替、全日光照、黑暗培养、紫外光处理，灭菌，接种，测量方法同1.2.1.1.接种后将培养皿倒置于25℃恒温箱中培养.

(4) pH值 采用干重法测定［1］，将在不同pH值的液体培养基培养7 d的菌液用称好质量的干燥定性滤纸过滤，过滤时用蒸馏水洗2～3次，连同滤纸一起干燥至恒质量，称过滤后滤纸与菌丝总质量，减去滤纸质量，得出菌丝体的干质量.

1.2.1.2 致腐微生物淀粉酶及纤维素酶活性的测定

培养基配方1：蛋白胨1 g，可溶性淀粉40 g，KNO3 1 g，(NH4)2SO4 0.5 g，CaCl2 0.5 g，CaCO3 0.5 g，Na3PO4 0.5 g，H2O 1 000 mL，pH=7.此配方用来培养致腐微生物产生α-淀粉酶.

培养基配方2：蛋白胨1 g，脱脂棉20 g，粗纤维20 g，(NH4)2SO4 0.5 g，CaCl2 0.5 g，KNO3 1 g，Na3PO4 0.5 g，CaCO3 0.5 g，H2O 1 000 mL，pH=7.此配方用来培养致腐微生物产纤维素酶.

粗酶液提取：将培养基装入三角瓶中，每瓶50 mL，灭菌后接种致腐菌于瓶中，在25℃下振荡培养7 d后，发酵液于4 000 r/min的转速下离心15 min，上清液即为酶粗提液，置冰箱中保存备用.

粗酶液活力测定：取酶作用底物适量（脱脂棉50 mg，2%的可溶性淀粉液1 mL），粗酶液1 mL于不同温度水浴中反应适当时间后取出，立即于沸水中煮沸15 min，使酶失活，取糖化液1 mL，采用DNS［2］法测还原糖量，以1 mL煮沸的酶液作空白对照.

1.2.2 板栗淀粉酶活性与板栗腐烂相关性测定 将耐贮品种锥栗、韶栗18号，中等耐贮品种阳山5号，易腐烂品种石丰、陕西红皮栗，在常温下瓶装密封贮藏1个月后，称取适量的板栗置研钵中加1 g石英砂，磨成匀浆倒入50 mL量筒中，用水稀释至刻度，混匀在室温（20℃左右）下静置，每隔几分钟振荡一次，放置15～20 min后，3 000 r/min离心5 min，上清液即为酶粗提液［3］.采用DNS［2］法应使搭接面通过传感器的力作用中心测还原糖量，以1 mL煮沸的酶液作空白对照.以1 g鲜板栗在pH=5.6，温度为40℃时，每分钟还原葡萄糖质量(μg)为酶活性单位.到贮藏结束后，计算板栗的保鲜率.

1.2.3 板栗总糖及还原糖电机马达含量与板栗腐烂相关性测定 称取板栗不同品种试样5 g， 放入100 mL三角瓶中， 加体积分数为85 ％的酒精20 ～30 mL与回流冷凝管连接， 并在水浴上加热30 min，取下三角瓶冷却后，过滤，尽量保留沉淀于瓶中.重复3次抽提. 然后将抽提液蒸去酒精，将糖浆液洗入250 mL容量瓶中得总糖提取液.还原糖测定采用费林氏液——肖氏法测定［4］.

不同品种总糖测定则将提取液用5%盐酸溶液酸化后(使提取液中酸度达0.05%)， 在沸水中酸解到提取液不能使1%淀粉液变蓝为止，取出冷却并将pH值调到微酸性后定容，按还原糖测定法测定总糖含量.

1.2.4 板栗失水率与板栗腐烂的相关性测定 将失水率分别为0%,5%,10%,15%,20%,25%的板栗分别用保鲜袋装好，用密封的瓶装室温保存，定期检查病果数，并挑出，试验结束后计算腐烂率.